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桿狀病毒-昆蟲細胞表達與純化

桿狀病毒表達系統(BEVS)屬于真核表達系統,安全性高,由于有較大的基因組所以能夠容納較大的外源基因,得到的重組病毒易于篩選,并且具有完備的翻譯后加工修飾系統和高效表達外源基因的能力。該系統由轉移載體、桿狀病毒載體和宿主細胞組成。該系統采用一個或多個桿狀病毒的超強啟動子,將外源目的基因插入到啟動子后,獲得重組病毒,這種重組病毒在昆蟲細胞復制的同時,使外源基因得到高效表達。

桿狀病毒表達系統與其他表達系統相比,具有以下的優勢:

(1)安全性:桿狀病毒具有嚴格的種屬特異性,不感染脊椎動物和植物,相對于其他病毒載體,如痘病毒、腺病 毒載體等,有較高的安全性。
(2)易于擴增:桿狀病毒可以大規模生產具有生物學活性的重組蛋白產品。
(3)外源基因表達效率高:與其他真核細胞表達系統相比,桿狀病毒系統可以從受感染的晚期細胞中高效地表達外源蛋白。
(4)表達產物具有較高活性:桿狀病毒將會在昆蟲宿主細胞中大量擴增,而且產生的重組蛋白會進行類似哺乳動物細胞中的翻譯后修飾,表達產物具有很強的生物活性。
昆蟲細胞表達系統
服務項目 特點優勢
重組供體質粒構建

利用交配輔助遺傳整合克隆(MAGIC)系統,只需要簡單的細菌混合,就可以快速構建重組桿狀病毒載體,能夠大大的節約時間,精力和花費;
可提供詳細表達純化條件,實驗數據以及高滴度的病毒毒株

重組桿狀病毒載體構建
表達條件優化
蛋白表達與純化
昆蟲細胞蛋白表達套餐
實驗項目 實驗流程 交付內容 時間
1.獲得重組供體質粒
●基因的獲得 核酸電泳圖片 2周
●PCR擴增產物酶切連接到本公司改造過的pFastBac載體
●轉化E.coliDH10β
●獲得測序正確的重組質粒
2.擴大化培養

●構建重組桿狀病毒載體
●重組桿狀病毒質粒轉染昆蟲細胞
●獲得高滴度的病毒貯液

含有重組桿狀病毒載體的質粒電泳圖片
高滴度的病毒貯液

3-4周
3.優化表達

●高滴度的病毒貯液再次感染昆蟲細胞
●表達產物SDS-PAGE電泳及western blot檢測

SDS-PAGE電泳圖及western blot印跡 1.5周
4.蛋白表達及純化 ●純化產物SDS-PAGE及western blot 1L上清的純化產 1-2周

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